9206 無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗證和應用指導原則 （
9206 無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗證和應用指導原則
本指導原則是為無菌檢查用隔離系統(tǒng)的驗證和應用提供指導。
無菌檢查用隔離系統(tǒng)是提供產(chǎn)品無菌檢查試驗用受控潔凈環(huán)境的一套集成 化系統(tǒng)，其性能特點主要體現(xiàn)在密閉系統(tǒng)的完整性，滅菌程序的有效性，無菌狀 態(tài)的維持能力等方面。
無菌檢查試驗應用隔離系統(tǒng)時，風險管理應貫穿無菌檢查用隔離系統(tǒng)的設(shè) 計、制造、安裝、調(diào)試、驗證、使用、維護和周期性回顧等工作流程中。
無菌檢查用隔離系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)
無菌檢查用隔離系統(tǒng)的內(nèi)部艙體構(gòu)成一個封閉的操作空間，與外界的空氣交 換均通過可截留微生物的高效空氣過濾系統(tǒng)進行；并能采用經(jīng)驗證的方式對內(nèi)部 表面進行滅菌處理；在滅菌完成后，通過輸入經(jīng)過濾的潔凈空氣來維持內(nèi)部的受 控環(huán)境；同時，所集成的監(jiān)測設(shè)備還可對滅菌過程和受控環(huán)境進行監(jiān)控。在試驗 過程中，封閉的隔離系統(tǒng)不直接與外界環(huán)境相連，可使用無菌接口、快速轉(zhuǎn)移通 道或者帶有滅菌功能的傳遞艙進行物料傳遞，物料經(jīng)過表面滅菌處理后，通過無 菌傳遞進入操作艙體，傳遞過程中可保持內(nèi)部空間和外部環(huán)境完全隔離，降低物 流引入污染的風險。隔離系統(tǒng)還從根本上避免了操作人員與試驗物品的直接接觸， 操作人員無需穿著專用潔凈服，而是通過艙體上的操作手套或半身操作服對艙內(nèi) 物品、儀器進行操作。因此，使用隔離系統(tǒng)進行無菌檢查，可以避免實驗用物品 和輔助設(shè)備被污染，提高了無菌檢查結(jié)果的準確性。
艙體
隔離系統(tǒng)的艙體按制造材質(zhì)，可分為硬艙隔離系統(tǒng)和軟艙隔離系統(tǒng)，硬艙隔 離系統(tǒng)的艙體一般由不銹鋼、玻璃或硬質(zhì)塑料等制成，軟艙隔離系統(tǒng)的艙體一般 由軟質(zhì)塑料制成。
手套-袖套組件或半身操作服為安裝在艙體上的部件，用于實現(xiàn)艙內(nèi)的試驗 操作，半身服覆蓋操作人員的軀干，并配有透明頭盔和通風裝置。
空氣處理系統(tǒng) 無菌檢查用隔離系統(tǒng)應配備可截留微生物的高效空氣過濾系統(tǒng)（或更高級別 的過濾系統(tǒng)）。隔離系統(tǒng)按內(nèi)部氣流組織區(qū)分，可分為單向流隔離系統(tǒng)和非單向流隔離系統(tǒng)。靜態(tài)時內(nèi)部環(huán)境的潔凈度應達到 A 級空氣潔凈度要求。無菌檢查 用隔離系統(tǒng)一般在正壓下操作，內(nèi)部應通過持續(xù)送風保持足夠的正壓來維持內(nèi)部 的無菌環(huán)境。
傳遞裝置
滅菌后的培養(yǎng)基、稀釋液和實驗用品可以通過有滅菌功能的傳遞艙直接無菌 傳遞到操作艙內(nèi)。此外，不同的隔離系統(tǒng)艙體也可以通過專門設(shè)計的快速傳遞門 （RTP）連接，以實現(xiàn)將實驗物品在兩個或多個艙體之間進行無菌傳遞。RTP 上 未經(jīng)滅菌的表面通過互鎖環(huán)或法蘭互相疊合，并通過密封圈封閉，從而防止微生 物進入隔離系統(tǒng)內(nèi)。
滅菌設(shè)備
隔離系統(tǒng)一般采用汽化的滅菌劑對內(nèi)部環(huán)境進行表面滅菌，目前較常用的滅 菌劑包括汽化過氧化氫、過氧乙酸等。滅菌蒸汽發(fā)生器可集成于隔離系統(tǒng)中，也 可獨立于隔離系統(tǒng)，與隔離系統(tǒng)之間的氣體管路連接，應確保其密封性。滅菌劑 應通過高效空氣過濾器進入隔離系統(tǒng)內(nèi)，滅菌結(jié)束后須對滅菌劑進行排空。
配套設(shè)備與輔助設(shè)施
監(jiān)測設(shè)備
隔離系統(tǒng)應配置對內(nèi)部潔凈環(huán)境和系統(tǒng)運行狀況進行監(jiān)測、報警 及記錄的設(shè)備。監(jiān)測設(shè)備應確保數(shù)據(jù)得到客觀真實的記錄，數(shù)據(jù)記錄的可靠性應 符合國家有關(guān)規(guī)定。
無菌檢查設(shè)備和工具
隔離系統(tǒng)內(nèi)部安裝無菌檢查使用的配套設(shè)備和輔助 設(shè)施，如無菌檢查過程中使用的蠕動泵、真空泵、物料裝載支架，廢棄物通道等。
隔離系統(tǒng)安裝位置的選擇
無菌檢查用隔離系統(tǒng)建議安裝在 D 級潔凈度區(qū)域；如安裝在受控非潔凈區(qū) 域，應進行充分的風險評估。安裝房間應限制無關(guān)人員出入，安裝地點應有足夠 的建筑承重，周圍有足夠的空間，以便于隔離系統(tǒng)的移動、物品的運輸和正常維 護。
用戶應充分考慮隔離系統(tǒng)與安裝環(huán)境之間的相互影響、及人員的安全性和舒 適性，在設(shè)計中應采取措施降低運行風險。隔離系統(tǒng)應避免安裝在房間通風口直 吹的地方，否則可能導致隔離系統(tǒng)艙體部分區(qū)域被冷卻，從而造成滅菌過程中滅 菌氣體在艙體內(nèi)壁局部過度冷凝。對于某些滅菌技術(shù)，溫濕度的控制是至關(guān)重要的。當采用對溫度敏感的滅菌方法時，隔離系統(tǒng)房間的溫度應當是均一的。此外， 滅菌劑排放的安全風險也應考慮。
隔離系統(tǒng)的驗證
隔離系統(tǒng)的首次驗證通常包括設(shè)計確認，安裝確認，運行確認和性能確認等 環(huán)節(jié)，驗證計劃的范圍與程度應當基于科學的風險評估。
隔離系統(tǒng)在用于無菌檢查前，其性能應得到全面確認且具有書面記錄。若隔 離系統(tǒng)配置了物料進出的傳遞艙或快速傳遞門接口，亦需驗證。
設(shè)計確認
在設(shè)計確認中，應關(guān)注隔離系統(tǒng)的關(guān)鍵性能，確認其滿足法規(guī)的一般性要求 并考慮用戶的使用特點，例如：根據(jù)使用目的，確定隔離系統(tǒng)的總體布局、工作 流程、主要功能實現(xiàn)方式；評估材質(zhì)和結(jié)構(gòu)設(shè)計與滅菌過程的兼容性，防范滅菌 不徹底及滅菌劑腐蝕的風險；評估無菌環(huán)境的維持能力，防范內(nèi)部設(shè)備運行和試 驗活動帶來的不利影響，防范外界污染侵入的風險；評估報警功能設(shè)計的合理性， 監(jiān)測設(shè)備和記錄功能的可靠性；評估環(huán)境和人員的安全要求等方面。
安裝確認
安裝確認是對隔離系統(tǒng)進行現(xiàn)場檢查，確認設(shè)備及其配套部件的供應與合同 一致，制造符合設(shè)計要求，并已按照要求進行正確安裝。在安裝確認中，對于因 設(shè)備配置缺失、選材錯誤、安裝不當?shù)仍斐傻娘L險應重點關(guān)注。
運行確認
運行確認一般包括以下內(nèi)容：
（1）操作性能
證明所有報警功能均能按照設(shè)定的要求正常工作、及隔離系統(tǒng)可按設(shè)定參數(shù) 值運行。計算機化控制的隔離系統(tǒng)還應關(guān)注用戶權(quán)限測試和數(shù)據(jù)記錄功能測試。
（2）隔離系統(tǒng)完整性
隔離系統(tǒng)在正常運行條件下應能保持良好的完整性。完整性測試通常包括： 已安裝高效空氣過濾器泄漏測試、艙體完整性、及手套和半身服的完整性。 高效
空氣過濾器需確認其安裝正確，過濾器及安裝框架無缺陷和滲漏，應至 少對安裝于艙體的末端過濾器進行檢漏，包括單向流系統(tǒng)的循環(huán)高效過濾器和非 單向流系統(tǒng)的進風高效過濾器；測試方法可參考《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境第 3部分：檢測方法》的現(xiàn)行國家標準中附錄 B6 已裝過濾系統(tǒng)檢漏進行。此外，非 單向流系統(tǒng)還需評估艙體排風高效過濾器的泄漏風險。
艙體完整性可通過壓力泄漏測試（例如壓力變化法或恒壓法）驗證設(shè)備是否 達到設(shè)計要求。測試期間應維持背景環(huán)境的穩(wěn)定，避免溫度和壓差的劇烈變化， 建議測試起始壓力不低于最高工作壓力的 2 倍。
手套和半身服完整性泄漏測試，在目視檢查的基礎(chǔ)上，手套采用手套檢漏儀 進行物理檢測，測試方法可參考《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境第 7 部分：隔離裝置》 的現(xiàn)行國家標準附錄 E5；半身服可采用充入示蹤氣體（例如氨氣）的化學方法 或其他適宜的方法進行檢測。
（3）壓差
應驗證隔離系統(tǒng)在靜態(tài)和動態(tài)條件下維持艙體正壓差的能力。靜態(tài)條件下壓 差范圍通常為 20～50Pa，最高不超過 100Pa。動態(tài)條件下，可由實驗人員在進行 模擬無菌檢查和空氣采樣操作的同時記錄艙體壓差，正常操作時應始終維持正壓。
（4）氣流
氣流測試包括風速及換氣次數(shù)測試，氣流流型測試。
應確認設(shè)備在無菌檢查狀態(tài)下的風速和換氣次數(shù)。單向流隔離系統(tǒng)應進行風 速及均勻性確認，測試方法可參考《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境第 3 部分：檢測方法》 的現(xiàn)行國家標準中附錄 B4 進行。單向流系統(tǒng)平均風速一般應符合（通則 9205） 中 A 級區(qū)的標準，非單向流系統(tǒng)換氣次數(shù)應進行風險評估，保證充分的自凈能 力。
氣流流型測試可參照《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境第 3 部分：檢測方法》的現(xiàn)行 國家標準中附錄 B7 氣流方向檢測和顯形檢查進行，采用去離子水霧發(fā)生器或者 煙霧筆發(fā)煙，確認艙體內(nèi)部的氣流流型，應當能夠證明所用氣流方式不會導致污 染風險。
（5）滅菌循環(huán)確認
該過程的目的在于確認所執(zhí)行的滅菌程序各步驟正常，運行值和設(shè)定值相符。 應針對制造商的操作要求選擇適宜的滅菌方法，并確定該方法的操作步驟。 滅菌劑分布的合理性可通過足夠數(shù)量的化學指示劑或生物指示劑布點的方 式確認。應在滿載條件下確認滅菌劑的分布，物料和試驗工具滿載的模式圖應當記錄確定。
在滅菌完成后，應通入潔凈氣流將滅菌劑排出，在排出過程中可以采用催化 分解裝置，應注意評估滅菌劑排出過程的安全性。
性能確認
隔離系統(tǒng)性能確認一般包含以下內(nèi)容：
（1）滅菌效果確認 隔離系統(tǒng)艙體內(nèi)表面、內(nèi)部的設(shè)備及進入艙體的各種物料都應經(jīng)過處理以降 低微生物負載。用于隔離系統(tǒng)、試驗物品的滅菌方法應能達到或超過使生物指示 劑下降 6 個對數(shù)值的效果?？墒褂媚撤N合適的、高抗性的生物指示劑來驗證。使 用充分數(shù)量的生物指示劑進行試驗可以從統(tǒng)計學上證明滅菌效果是可以再現(xiàn)以 及滅菌劑的分布是否合適。尤其要注意那些滅菌劑濃度較低的地方。隔離系統(tǒng)內(nèi) 物品和設(shè)備滿載時需要用更多的生物指示劑進行試驗。滅菌程序的確定要經(jīng)過三 次連續(xù)的驗證且能使生物指示劑下降達到或超過 6 個對數(shù)值。
應根據(jù)工作流程設(shè)計和無菌維持情況，確定隔離系統(tǒng)再滅菌的頻率（參照隔 離系統(tǒng)內(nèi)部環(huán)境的無菌維持）。
（2）滅菌劑殘留確認
用戶應評估滅菌劑殘留可能導致的假陰性風險。在滅菌完成后，應通過能有 效測定殘留的低濃度量程檢測器（或測試管）監(jiān)測艙內(nèi)滅菌劑的濃度，保證在無 菌檢查開始后，艙內(nèi)的滅菌劑殘留量不得影響無菌檢查的結(jié)果。
環(huán)境中滅菌劑濃度應符合《工作場所有害因素職業(yè)接觸限制第 1 部分：化學 有害因素》現(xiàn)行國家標準的規(guī)定。
（3）隔離系統(tǒng)內(nèi)部潔凈度確認
隔離系統(tǒng)艙體內(nèi)部的潔凈環(huán)境應進行確認，其懸浮粒子（靜態(tài)），沉降菌， 浮游菌和表面微生物按照藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導原則（通則 9205）測定，應符合 A 級空氣潔凈度的要求。
離線滅菌的 RTP 傳遞容器，應當根據(jù)離線滅菌方式（如濕熱滅菌，輻照滅 菌等）進行滅菌效果確認，如為商品化的一次性產(chǎn)品，用戶應要求制造商提供滅 菌驗證的證明，并在 RTP 傳遞容器與隔離系統(tǒng)對接后，對 RTP 接口兩側(cè)的滅菌 面，以及容器內(nèi)部進行表面微生物采樣。
隔離系統(tǒng)的再驗證
為保障隔離系統(tǒng)在生命周期內(nèi)的穩(wěn)定運行，維持有效的驗證狀態(tài)，用戶還應 根據(jù)風險評估情況制定隔離系統(tǒng)的再驗證計劃。
重要儀器儀表，例如壓差儀表，溫濕度儀表，風速儀表、流量儀表、粒子計 數(shù)器、滅菌劑濃度傳感器、稱量天平等應定期進行校驗。
隔離系統(tǒng)的再驗證一般包括年度驗證和期間核查，用戶應按照文件化的程序 及規(guī)定的可接受標準實施再驗證。再驗證計劃應圍繞密閉系統(tǒng)的完整性，滅菌程 序的有效性，無菌狀態(tài)的維持能力等關(guān)鍵性能進行評估。再驗證的結(jié)果應形成記 錄并保存。
此外，用戶在設(shè)備使用中，出現(xiàn)運行程序或參數(shù)變更、維護時更換重要配件、 發(fā)生運行異常并完成維修后、安裝場地變更以及長時間停用后的再啟用等情況時， 也應進行相應的再驗證。
隔離系統(tǒng)的應用
用戶完成隔離系統(tǒng)驗證后，若將其用于無菌檢查，應根據(jù)設(shè)備和自身無菌檢 查工作特點，確定相關(guān)的應用規(guī)范。
包裝完整性驗證
隔離系統(tǒng)常用的汽化滅菌劑在滅菌循環(huán)過程中不會穿透螺旋蓋試管和玻璃 瓶、壓塞玻璃瓶、西林瓶、安瓿等密封完好的容器，然而，滅菌劑對某些包裝物 會產(chǎn)生不利影響，可能抑制微生物生長。為避免假陰性風險，可采取適當措施， 如選用能夠耐受滅菌劑滲透的包裝材料或其它適宜的方法，以減少滅菌劑浸入包 裝和容器內(nèi)，但所采取的措施應避免造成滅菌不徹底。在某些程度上，也可通過 降低滅菌劑的濃度及縮短滅菌周期，來降低滅菌劑的滲透風險，但相應的滅菌循 環(huán)應進行充分驗證。
在試驗物品放入艙體之前，有時也會使用滅菌劑對物品包裝表面進行預處理， 以減少微生物負荷。無論是預處理還是滅菌循環(huán)過程，應通過驗證試驗證明暴露 于這些過程中的供試品、無菌檢查使用器材、稀釋劑和培養(yǎng)基，不會由于滅菌劑 的滲透而影響供試品中低水平微生物污染的檢出。建議用化學和微生物挑戰(zhàn)試驗 測試包裝物對滅菌劑滲透的抵抗能力，微生物試驗時應使用至少經(jīng)過一輪完整滅 菌循環(huán)處理后的物品，驗證其能符合相應微生物種類的回收試驗的要求。
對于無法通過包裝完整性驗證的供試品，用戶應考慮其在隔離系統(tǒng)中操作的 風險。
隔離系統(tǒng)內(nèi)部環(huán)境的無菌維持
隔離系統(tǒng)內(nèi)部環(huán)境在操作周期內(nèi)的無菌維持能力可通過執(zhí)行微生物監(jiān)測程 序進行驗證。在進行連續(xù)多天的無菌維持時，帶傳遞艙的系統(tǒng)可每天進行采樣， 不帶傳遞艙的系統(tǒng)可在滅菌后的第一天和無菌維持期的最后一天進行采樣，并對 采樣進行培養(yǎng)。通過周期性的采樣分析，實現(xiàn)對艙內(nèi)無菌維持情況的驗證。因隔 離系統(tǒng)出現(xiàn)故障或者偶然因素引起的微生物污染必須進行調(diào)查。
除浮游菌和沉降菌外，隔離系統(tǒng)內(nèi)部表面可采用平面接觸碟、不規(guī)則的表面 可采用拭子搽拭采樣進行微生物監(jiān)控。由于培養(yǎng)基殘留會使隔離系統(tǒng)產(chǎn)生染菌風 險，因此，最好在檢驗完成后進行表面微生物監(jiān)測，如果在檢驗過程中進行采樣， 需及時清理培養(yǎng)基殘留。
檢驗用具和供試品進入艙內(nèi)的過程最可能造成微生物的污染，所以應確保進 入隔離系統(tǒng)物品及傳遞過程的無菌性。
手套和半身衣是另一個微生物污染源，尤其是用于處理無菌檢驗物品的手套， 應當特別關(guān)注。試驗用手套應保證其完整性，選擇手套時應考慮其穿刺抗性和耐 磨性，并有良好的觸感。
艙體內(nèi)部進行連續(xù)的懸浮粒子檢測，可快速檢測到過濾器的泄漏，也可使用 便攜式的懸浮粒子檢測器進行周期性檢測，懸浮粒子和微生物采樣不能對艙體內(nèi) 部的無菌環(huán)境產(chǎn)生影響。
日常使用規(guī)范
為保障設(shè)備性能處于受控狀態(tài)，用戶應制定日常使用規(guī)范，一般包括以下幾 個方面：
（1）完整性檢測
在每次無菌檢查開始前及結(jié)束后，建議對艙體和手套/袖套的完整性進行檢 測，檢測頻率也可根據(jù)風險評估確定。
手套完整性檢測按運行確認中的隔離系統(tǒng)完整性項下方法進行，也可采用其 他方法如微生物法作為補充，檢測時將手套浸入適宜培養(yǎng)基或沖洗液中，然后將 浸泡液直接培養(yǎng)或采用薄膜過濾處理后取濾膜培養(yǎng)，根據(jù)是否生長微生物判定手套的完整性，本法可以檢測出其他方法檢測不出的泄漏。
（2）監(jiān)測和記錄
每次試驗時，為確保設(shè)備按經(jīng)驗證的設(shè)定參數(shù)運行，應對設(shè)備運行狀態(tài)和內(nèi) 部環(huán)境指標進行監(jiān)測和記錄。
（3）日常清潔
無菌檢查用隔離系統(tǒng)每次試驗前后應進行清潔，對內(nèi)部和物品包裝表面的清 潔程度以達到肉眼可見的干凈干燥為宜。
滅菌程序開始前，對表面的預清潔有利于降低微生物負荷，保障滅菌效果。 試驗后，應注意被檢樣品殘留的清潔，特別是抗生素類產(chǎn)品，以避免影響后續(xù)被 檢樣品中污染微生物的檢出。選用的清潔劑應具有良好清潔效果，不腐蝕材質(zhì)， 殘留對無菌檢查無不利影響。清潔工具建議采用無塵材料，清潔方法、頻度及清 潔用設(shè)備和材料應予以規(guī)范。
（4）培訓與安全
操作人員在使用隔離系統(tǒng)進行無菌檢查前，應接受特定操作規(guī)程、日常維護 及安全相關(guān)知識的培訓，并經(jīng)考核合格后上崗，按權(quán)限級別進行隔離系統(tǒng)的操作。 培訓內(nèi)容及考核成績應記錄在個人培訓記錄中。
操作人員必須遵守化學滅菌劑貯存及使用的安全事項的規(guī)定，應在隔離系統(tǒng) 安裝地點的顯著位置張貼化學滅菌劑的材料安全數(shù)據(jù)表（MSDS）。隔離系統(tǒng)使 用前，需要對設(shè)備的安全性進行檢查并做好使用記錄；使用時還應注意電氣安全， 預防滅菌劑泄漏可能造成的電氣事故。計算機化系統(tǒng)控制的設(shè)備，應考慮記錄數(shù) 據(jù)的安全保存。
（5）維護和周期性回顧
應根據(jù)使用特點和供應商建議制定預防性的設(shè)備維護和耗材更換計劃，定期 檢查并根據(jù)使用情況及時更換，常用耗材包括手套、半身服、空氣過濾器、密封 墊圈、蠕動泵管、聚氯乙烯艙體等。
建議定期對隔離系統(tǒng)使用情況進行總結(jié)，內(nèi)容可涵蓋無菌檢查結(jié)果回顧、環(huán) 境數(shù)據(jù)統(tǒng)計和趨勢分析、歷次故障/偏離情況的調(diào)查、硬件和軟件升級情況調(diào)查、 操作規(guī)程修訂回顧等。
無菌檢查結(jié)果的解釋
如果隔離系統(tǒng)處于良好的驗證和維護狀態(tài)，其系統(tǒng)的完整性經(jīng)過確認，且內(nèi) 部空間及表面已經(jīng)過滅菌工藝處理，操作人員與無菌檢查環(huán)境沒有直接接觸，那 么在經(jīng)過驗證且功能正常的隔離系統(tǒng)內(nèi)進行無菌檢查，假陽性結(jié)果很低。盡管如 此，隔離系統(tǒng)也僅是個機械設(shè)備，操作人員仍需遵循無菌操作規(guī)范。當出現(xiàn)無菌 檢查試驗結(jié)果陽性時，應按照無菌檢查法（通則 1101）中結(jié)果判斷的要求進行 分析，并作出該試驗結(jié)果是否有效的判定。
